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荧光光谱仪定量分析误差高?样品制备与参数设置的避坑指南

2025-05-23

金彩汇荧光光谱仪定量分析误差高,可从样品制备和参数设置两方面排查并解决,以下是详细避坑指南:

样品制备

样品纯度

去除杂质:杂质可能产生额外荧光信号干扰测定,使结果偏差大。比如分析生物样品中特定荧光物质,蛋白质、核酸等杂质会有荧光。可采用过滤、离心、萃取等方法去除杂质。像用超滤离心管去除小分子杂质,高速离心分离细胞碎片。

提纯目标物:若样品中目标物含量低且与其他物质混杂,需提纯。常用柱层析、高效液相色谱等方法。如用硅胶柱层析分离植物提取物中的荧光成分。

样品浓度

金彩汇控制范围:浓度过高会使荧光自熄灭,过低则信号弱、检测误差大。不同仪器和样品适用的浓度范围有别,要先做预实验确定。一般先稀释系列浓度样品测定,选线性范围内的浓度进行分析。

均匀性:确保样品浓度均匀,特别是悬浊液或乳浊液样品。充分振荡、搅拌或超声处理使样品分散均匀后再取样分析。

样品溶剂

选择合适溶剂:溶剂要能溶解样品且不与样品发生反应,还要考虑对荧光的淬灭作用。如测定多环芳烃,常用环己烷、二甲基亚砜等作溶剂。

金彩汇避免溶剂背景干扰:溶剂自身可能有荧光,干扰测定。选背景荧光低的溶剂,若无法避免,可做空白对照扣除溶剂背景。

样品稳定性

防止光解:有些样品光照下易分解,导致荧光性质改变。分析时用棕色样品池或避光操作,缩短样品在光照下时间。

金彩汇控制温度和pH值:温度和pH值影响样品荧光性质。如某些荧光物质在不同pH值下荧光强度和波长变化大,需在适宜pH值和温度下分析,必要时用缓冲溶液稳定pH值。

参数设置

激发光波长

选择最大激发波长:用荧光激发光谱确定样品最大激发波长,在此波长下激发,荧光强度最大、灵敏度最高。若选错激发波长,荧光信号弱,误差增大。

避免干扰:检查激发光波长附近有无其他物质吸收或干扰,若有需调整波长或采取其他措施消除干扰。

发射光波长

金彩汇选择最大发射波长:通过荧光发射光谱找出样品最大发射波长,以此设置发射光波长,保证检测到最强荧光信号。

考虑斯托克斯位移:一般发射光波长比激发光波长长,即存在斯托克斯位移。设置发射光波长时考虑此因素,避免激发光直接进入检测器造成干扰。

狭缝宽度

金彩汇平衡灵敏度和分辨率:狭缝宽度影响仪器灵敏度和分辨率。宽度大,进入检测器的光多,灵敏度高,但光谱分辨率降低;宽度小则相反。根据样品荧光峰宽和分析要求调整,一般先选较窄狭缝提高分辨率,若信号弱再适当放宽。

避免过宽或过窄:过宽狭缝使光谱重叠,导致定量误差;过窄则信号太弱,检测困难。

扫描速度

保证数据准确性:扫描速度过快,仪器来不及充分检测荧光信号,导致数据不准确;过慢则分析时间长。根据样品荧光特性和仪器性能选择合适扫描速度,一般先选中等速度测试,再调整。

金彩汇稳定扫描:确保扫描过程中速度稳定,避免波动影响结果。

增益和光电倍增管电压

金彩汇合理设置增益:增益影响信号放大倍数,过高会使噪声增大,过低则信号弱。根据样品荧光强度调整,使信号在仪器检测范围内且信噪比合适。

金彩汇控制光电倍增管电压:电压影响检测灵敏度,过高易损坏光电倍增管,过低则灵敏度不够。按仪器说明书设置合适电压,尽量保持稳定。

荧光光谱仪 DF-2000

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